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用于治療藥物監(jiān)測(cè)的100多種藥物的自動(dòng)化樣本制備

更新時(shí)間:2024-12-26瀏覽:170次

由于每個(gè)患者對(duì)治療藥物的吸收和代謝不同,正確的給藥對(duì)避免毒性反應(yīng)和保持藥物在治療水平至關(guān)重要,這就是患者血清或血漿樣本中的治療藥物監(jiān)測(cè)(TDM)發(fā)揮作用的地方。該分析的金標(biāo)準(zhǔn)是LC-MS/MS;然而當(dāng)樣本量比較大時(shí),手動(dòng)制備樣本是一個(gè)很大的挑戰(zhàn)。在這里,我們描述了如何使用Hamilton MassSTAR自動(dòng)化系統(tǒng)與MassTox®TDM Series A通過(guò)LC-MS/MS對(duì)100多種藥物進(jìn)行自動(dòng)樣品制備和分析。

圖片

系統(tǒng)描述

MassSTAR基于Hamilton Microlab® STARlet平臺(tái),配備4個(gè)通道:CO-RE®抓手、條形碼閱讀器和一個(gè)整合的離心機(jī)。臺(tái)面上由樣本載架、試劑載架、標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照載架、深孔板(DWP)和移液吸頭載架以及Hamilton加熱振蕩器(HHS)組成。每次運(yùn)行,系統(tǒng)最多可處理96份樣本,包括對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)品。

試劑盒描述

樣品制備基于Chromsystems的MassTox®TDM Series A,這是一種模塊化系統(tǒng),由三個(gè)部分組成:特定參數(shù)集、色譜柱和BASIC Kit A。參數(shù)集包含特定藥物的單個(gè)校準(zhǔn)品、對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物。色譜柱本身可監(jiān)測(cè)近200個(gè)參數(shù),而無(wú)需色譜柱切換或改變流動(dòng)相。結(jié)合所有參數(shù)集中幾乎相同的樣本制備工作流程,這有助于最大限度地減少實(shí)驗(yàn)室的工作量。到目前為止,超過(guò)100個(gè)參數(shù)的樣品制備可以在MassSTAR上實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化,將來(lái)會(huì)有更多。這些藥物包括抗抑郁藥、抗癲癇藥、抗真菌藥、麥考酚酸和精神安定藥。為了獲得較高的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性,幾乎所有的參數(shù)都由內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)來(lái)保障。結(jié)果的可追溯性通過(guò)使用基于基質(zhì)的校準(zhǔn)材料來(lái)保證。

工作流程

首先,加載所有資源,并追蹤樣本和板的條形碼。均質(zhì)化后,將50µl樣本/校準(zhǔn)品/對(duì)照品轉(zhuǎn)移至96深孔板中。加入25µl提取緩沖液,并以600 rpm轉(zhuǎn)速振蕩2分鐘。將250µl制備的內(nèi)標(biāo)溶液移液至各孔中,并以1000 rpm轉(zhuǎn)速振蕩30秒。然后以2000xg離心5分鐘,分離沉淀物。將上清液轉(zhuǎn)移至第二個(gè)深孔板中,并用稀釋緩沖液稀釋。稀釋因子取決于參數(shù)設(shè)置和特定質(zhì)譜儀。

技術(shù)

其中一個(gè)關(guān)鍵特點(diǎn)是設(shè)備的吸放液全程實(shí)時(shí)監(jiān)控 (TADM™)技術(shù)。實(shí)時(shí)監(jiān)控每個(gè)移液通道中的每個(gè)吸液和分液步驟。TADM™通過(guò)可追溯的數(shù)字審計(jì)跟蹤驗(yàn)證樣本轉(zhuǎn)移,并識(shí)別錯(cuò)誤,如樣本中有血凝塊或轉(zhuǎn)移的體積不正確。圖形用戶界面 (GUI) 引導(dǎo)用戶完成加載過(guò)程以及庫(kù)存檢查(例如,條形碼匹配、檢查微孔板位置是否正確、驗(yàn)證試劑的適當(dāng)液位)。這意味著在運(yùn)行開始前,所有試劑和耗材均可獲得足夠的數(shù)量,確保不需要進(jìn)一步的用戶干預(yù),從而延長(zhǎng)無(wú)人值守時(shí)間。描述性界面監(jiān)測(cè)樣品制備過(guò)程的實(shí)時(shí)狀態(tài),并顯示系統(tǒng)接下來(lái)將執(zhí)行的步驟。GUI還防止無(wú)效的用戶輸入,并保護(hù)方法文件免受未經(jīng)授權(quán)的操作。此外,為MassTox®TDM Series量身定制的試劑載架能夠?qū)⒎治鲈噭┘虞d到其原始容器中,試劑不必轉(zhuǎn)移,節(jié)省時(shí)間,防止污染和試劑混合,并減少液體的蒸發(fā)。

結(jié)果

測(cè)定了所有藥物的回收率,回收率取決于分析物,范圍81%-115%。

測(cè)定了重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性,以確定總體方法的精度。將至少兩種不同濃度水平的樣品制備10次,并在單個(gè)序列中進(jìn)行測(cè)定。變異系數(shù)為0.6到13.7%之間,取決于相應(yīng)的分析物和濃度水平。在不同日期制備并測(cè)定至少3個(gè)不同濃度水平的樣品(20×5或10×2×2設(shè)計(jì)),得到的變異系數(shù)在0.9%至18.9%之間。此外,在三個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)室中,在五個(gè)不同的日期,使用進(jìn)行五次樣品制備(3x5x5設(shè)計(jì)),測(cè)定至少三個(gè)濃度水平的重現(xiàn)性。所得變異系數(shù)在3.2~25.7%之間。說(shuō)明書中提供了每個(gè)參數(shù)集的綜合數(shù)據(jù)。

對(duì)于所有分析物,通過(guò)向血清和血漿樣本中加規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定定量下限(LLOQ)和定量上限(ULOQ)。對(duì)于所有藥物,LLOQ和ULOQ涵蓋治療藥物監(jiān)測(cè)所需的臨床相關(guān)濃度范圍。

方法比較

使用MassTox®TDM Series A采集并分析真實(shí)患者樣本。所有樣本均已手動(dòng)處理并在MassSTAR上進(jìn)行比較。

結(jié)果表明,MassSTAR樣本制備與手動(dòng)處理之間具有良好的相干性和可比性。

圖片

 

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